作者： 刘志国;何建伟;胡松

期刊： 武汉轻工大学学报,2006年25(2):1-4 ISSN：2095-7386

作者机构： 武汉工业学院,生物与制药工程系,湖北,武汉,430023;[胡松; 何建伟; 刘志国] 武汉工业学院

关键词： 玫瑰色素;稳定性;吸光度

摘要： 研究了玫瑰色素的稳定性，探讨了不同条件对玫瑰色素稳定性的影响。实验采用分光光度法，测定不同条件下玫瑰色素的特征吸收光谱的变化。确定了各种条件对玫瑰色素稳定性的影响。结果显示，玫瑰色素对温度、pH的耐受性较好，对还原剂稳定，但对氧化剂敏感，在光照条件下也不稳定。蔗糖、柠檬酸、盐等对其稳定性影响不大。因此，玫瑰色素可以作为蜂蜜、啤酒、饮料等食品的特殊风味色素添加剂。

语种： 中文

作者： 屈伸;刘志国

期刊： 湖北科技学院学报(医学版),2005年19(5):369-374 ISSN：2095-4646

作者机构： 华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系,湖北,武汉,430023;武汉工业学院生物与化学工程系;[屈伸] 华中科技大学;[刘志国] 武汉工业学院

关键词： 极低密度脂蛋白受体;多功能;功能活动;受体超家族;种细胞;甘油三酯;细胞内;代谢

摘要： 极低密度脂蛋白受体(VLDL-R)是低密度脂蛋白受体超家族的成员,主要分布于脂酸代谢活跃的组织,参与甘油三酯的代谢.然而,近年来的研究表明,VLDL-R参与多种细胞的活动,与细胞的增殖、迁移[1]以及细胞的分化等重要细胞功能活动密切相关,故被认为是细胞内重要的多功能受体[2].人VLDL-R基因首先由Yamamoto等在构建兔LDL-R cDNA文库的研究中,在非严格条件下筛选时得到.

语种： 中文

作者： 毕昊;刘志国;屈伸;王亚林;吴琼

期刊： 华中科技大学学报(医学版),2005年34(6):699-702,706 ISSN：1672-0741

作者机构： [毕昊; 屈伸; 吴琼] 华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系;[刘志国; 王亚林] 武汉工业学院生物与化学工程系

关键词： 米糠蛋白;胃蛋白酶;胰蛋白酶;血管紧张素转化酶抑制剂;分离和提纯

摘要： 目的从米糠蛋白酶解产物中提取制备血管紧张素转化酶（ACE）抑制剂。方法采用等电点沉淀的方法提取米糠中的蛋白质，先后经胃蛋白酶和胰蛋白酶水解后，采用凝胶层析法分离酶解组分，检测各组分ACE抑制性，对活性较强的组分用阳离子交换树脂SP—Sephadex C-25作进一步的分离检测。结果获得的ACE抑制肽分子量为307．1，其等电点在5～6之间。它在消化液中具有稳定性。其IC50为0．061mg／ml。结论从米糠蛋白酶解产物中获取了ACE抑制剂。

语种： 中文

作者： 陈江源;代江红;刘志国;赵静国;王亚林;...

期刊： 化学与生物工程,2005年022(7):33-35,45 ISSN：1672-5425

作者机构： [陈江源] 武汉市护理学校;武汉工业学院生物与化学工程系;华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系 湖北武汉430040;湖北武汉430023;湖北武汉430022

关键词： 麦角茵;原生质体;诱变育种;麦角酰胺

摘要： 为了提高在一般条件下不易产生分生孢子的雀稗麦角菌的产碱率,对原生质体诱变育种的条件和方法进行了探讨.实验表明,对麦角酰胺产生菌的原生质体用紫外线照射5 min、7 min、9 min进行诱变处理,可获得较稳定的高产突变株.麦角酰胺的产率由原始菌株的58 mg·L-1提高到459 mg·L,增加了约7倍,连续传代培养可以得到稳定的高产菌株,说明用原生质体进行诱变处理,对提高麦角酰胺的产率是可行的.

语种： 中文

作者： 吴琼;刘志国;王亚林;毕昊;陈江源;...

期刊： 生物技术通讯,2005年16(6):638-641 ISSN：1009-0002

作者机构： 华中科技大学,同济医学院生物化学与分子生物学系,湖北,武汉,430030;武汉工业学院,生物与化学工程系,湖北,武汉,430023;武汉市护理学校,湖北,武汉,430040

关键词： 血管紧张素转换酶;米糠蛋白;抑制剂

摘要： 采用盐析法提取米糠蛋白,分别选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等单独或联合水解米糠蛋白,以从酶解米糠蛋白中分离获得具有血管紧张素转换酶(ACE)抑制活性的短肽组分.经Sephadex G-15凝胶层析和SP-Sephadex C-25离子交换层析分离各酶解组分,并检测各组分的ACE抑制活性.结果表明,米糠蛋白的酶解分离产物中含有较强ACE抑制活性的组分,其中经胃蛋白酶和胰蛋白酶共同水解时得到的小分子量寡肽组分的抑制活性最强,为后续对其进行结构分析奠定了基础.

语种： 中文

作者： 刘志国;张宇;张振新;郁峰

期刊： 武汉轻工大学学报,2005年24(1):1-3+7 ISSN：2095-7386

作者机构： [张振新; 张宇; 郁峰; 刘志国] 武汉工业学院

关键词： 玫瑰花;干花;色素提取;温度;柠檬酸;最佳条件;原料;物料浓度;工艺条件;研究

摘要： 以玫瑰干花与玫瑰花酱为原料,研究玫瑰色素提取的工艺条件,并对有关参数进行优化.实验结果表明玫瑰花花酱提取最佳条件为10%柠檬酸,温度50 ℃,时间30 min,物料浓度10 g/100 ml,提取一次(或15g/100 ml,提取两次).玫瑰花干花提取最佳条件为15%柠檬酸,温度50 ℃,时间90 min,物料浓度2 g/100 ml,提取两次.

语种： 中文

作者： 杨汉民;刘志国;王亚林

期刊： 化学与生物工程,2005年22(4):9-11 ISSN：1672-5425

作者机构： 武汉工业学院生物工程与化学工程系,湖北,武汉,430023

关键词： 纳米粒子;纳米管;杂多化合物;稀土元素;制备

摘要： 以Triton X-100/n-C10H21OH/H2O体系W/O微乳液为基础,分别以K8[Ce(Ⅳ)W10O33]·32H2O 和Pb(NO3)2水溶液代替组分水制备W/O微乳液.然后将两种微乳液混合,得到黄色沉淀的Pb4[Ce(Ⅳ)W10O33]·32H2O纳米粒子,同时有少量纳米管生成.经电镜分析所得Pb4[Ce(Ⅳ)W10O33]·32H2O纳米粒子为粒径低于5 nm的圆球状颗粒,所得Pb4[Ce(Ⅳ)W10O33]·32H2O纳米管管长约为50 nm,管径约为5 nm.并用TG-DTA和Raman对该化合物进行了表征.

语种： 中文

作者： 刘志国;王亚林;赵静国;熊万斌;王柳;...

期刊： 化学与生物工程,2004年21(2):18-21 ISSN：1672-5425

作者机构： 武汉工业学院生物与化学工程系,湖北,武汉,430023

关键词： 雀稗麦角菌;麦角碱;发酵技术;色氨酸;琥珀酸胺;甘露醇;药物;产后出血症;妇科药物

摘要： 研究了雀稗麦角菌产麦角碱发酵条件.通过正交实验确定了影响雀稗麦角菌产碱的主要因素为色氨酸,其次是琥珀酸胺,进一步用单因素分析方法探讨了各影响因素的浓度与产碱量之间的关系,确定了较为理想的发酵条件,即:色氨酸0.1%、甘露醇10%、琥珀酸胺4%、MgSO4·7H2O 0.025%,用氨水调pH 5.2,于24～26℃,使用二级种子摇瓶发酵培养,经11～13 d培养,平均产碱率为58.6 mg·L-1.

语种： 中文

作者： 张红;刘志国;屈伸

作者机构： [张红; 刘志国; 屈伸] 华中科技大学同济医学院基础医学院生化与分子生物学系;[张红; 刘志国; 屈伸] 武汉工业学院生物与化学工程系

会议名称： 湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会

会议时间： 2004-01-01

会议地点： 中国武汉

会议论文集名称： 湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会论文摘要汇编

关键词： 受体相关蛋白;原核表达;诱导;纯化;竞争结合;拮抗

摘要： 受体相关蛋白(Receptor associated protein,RAP)是一种常驻内质网蛋白,分子量39kDa,目前已证实是低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLR)家族的特异性分子伴侣,对该家族受体由内质网向胞膜运输、正确折叠成熟、在成熟过程中避免自身发生聚集及免受其他配体的结合攻击起至关重要的作用。在体外,该蛋白可使原核表达的极低密度脂

语种： 中文

作者： 刘志国;王燕;屈伸;冯友梅;吴凡;...

期刊： 当代医学科学,2004年24(4):314-317 ISSN：2096-5230

通讯作者： Liu, Z.

作者机构： [刘志国] Department of Biotechnology and Chemical Engineering, Wuhan Polytechnic University, Wuhan 430023, China;[赵则春] College of Life Science, Wuhan University, Wuhan 430072, China;[屈伸; 冯友梅; 王燕; 吴凡; 宗义强] Department of Biochemistry and Molecular Biology, Tongji Medical College, Huashong University of Science and Technology, Wuhan 430030

通讯机构： Department of Biotechnology and Chemical Engineering, Wuhan Polytechnic University, China

关键词： β-VLDL;VLDL-R's;PKC-ERK1/2;VLDL receptor;β-VLDL;signal transduction;ERK1/2;lipid accumulation

摘要： To explore the intracellular signal pathways for β-VLDL induced very low density lipoprotein receptor (VLDL-R) transcription up-regulation and their effects on lipid accumulation in macrophages, Western Blot was used to examine phosphorylated ERK1/2 protein and regulated effects by different singal kinase inhibitants. It was found that β-VLDL induced an increase in ERK1/2 activity in a protein kinase C (PKC)-dependent manner in murine RAW264.7 macrophages. By using different protein kinases inhibitors or activators, it was observed that the effect of β-VLDL induced VLDL receptor transcription, which was monitored by RT-PCR analysis of VLDL receptor mRNA, was not affected by the inhibitor of p38 kinase and cAMP analog, but extremely abolished by pretreating cells with PD98059, an inhibitor of ERK and GF 109203X, an inhibitor of PKC. These results demonstrated that the PKC-ERK1/2 cascade is the essential signaling pathway by which β-VLDL activated VLDL-R mRNA expression. Inhibition of the ERK1/2 signaling cascade resulted in suppression of the cellular lipid accumulation induced by β-VLDL in macrophages.

语种： 英文

作者： 张红;刘志国;屈伸

期刊： 华中科技大学学报(医学版),2004年33(3):265-268,272 ISSN：1672-0741

作者机构： [张红; 屈伸] 华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系;[刘志国] 武汉工业学院生物与化学工程系;华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系 武汉430030;武汉430023

关键词： 受体相关蛋白

摘要： 目的 获得人源受体相关蛋白(RAP)，对表达条件进行优化。方法 RAP cDNA被插入到原核表达质粒 pT7-L和pET-28a(+)中，分别构建成RAP重组表达载体，转化两种BL21菌株后，转化菌用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导，选择pT7-PL-RAP质粒进行表达条件的优化，采用镍离子亲和层析纯化所获得的RAP，通过检测与巨噬细胞的结合能力评估其生物活性。结果 两个重组质粒均获得了RAP的高表达，对于pT7-PL-RAP质粒， RAP在BL21(DE3，plysS)菌株中的表达显著高于在BL21(DE3)菌株的表达；有氯霉素存在时表达高于无氯霉素时；诱导表达的RAP大部分为可溶性的；镍离子亲和层析树脂纯化所获得的RAP，可与富含低密度脂蛋白受体(LDLR)家族受体的小鼠巨噬细胞系RAW264．7结合。结论 本实验获得了有生物学功能的RAP，为进一步开发生产此蛋白打下良好的基础。

语种： 中文

作者： 姚妍怡;刘志国;屈伸

期刊： 华中科技大学学报(医学版),2004年33(2):109-112 ISSN：1672-0741

作者机构： [姚妍怡; 屈伸] 华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系;[刘志国] 武汉工业学院生物与化学工程系;华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系 武汉430030;武汉430023

关键词： 载脂蛋白E;突变体;克隆;RT-PCR法;融合蛋白

摘要： 目的克隆人3种类型载脂蛋白E(apolipoprotein E，apoE)cDNA，表达并纯化3种apoE融合蛋白。方法采用RT-PCR方法从肝组织中克隆得到apoE3 cDNA，以此为基础通过定点突变得到apoE2和apoE4的cDNA。将上述3种cDNA亚克隆到含有His标签的融合表达载体pT7一PL中，表达的蛋白经镍离子柱亲和层析纯化。结果序列分析表明，获得的apoE2、apoE3、apoE4与GenBank中的一致。表达并纯化了N端带有6个组氨酸的apoE2、 apoE3、apoE4融合蛋白。结论 成功地获得了人3种类型apoE cDNA和3种apoE融合蛋白。

语种： 中文

作者： 姚研怡;刘志国;屈伸

作者机构： [姚研怡; 刘志国; 屈伸] 华中科技大学同济医学院基础医学院生化与分子生物学系;[姚研怡; 刘志国; 屈伸] 武汉工业学院生物与化学工程系

会议名称： 湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会

会议时间： 2004-10

会议地点： 中国武汉

会议论文集名称： 湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会论文摘要汇编

关键词： 基因克隆;定点突变;基因表达;纯化

摘要： ApoE由299个氨基酸组成,具有多种生物学功能。人类apoE的合成是由三个等位基因ε2、ε3和ε4所控制,分别编码血浆中三种亚型E2、E3和E4。虽然poE的三种亚型之间仅为一个氨基酸的改变,即E2（Cys112,Cys158）、E3（Cys112,Arg158）、E4（Arg112,Arg158）,但是它们在结构乃至生理功能、病理效应上却有着重大的差异。遗传研究表明apoE4基因型是冠心病及散发型、迟发型阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）的危险因素,同时apoE2基因型与遗传性Ⅲ型高脂血症有关。为了从分子水平研究apoE各亚型的结构差异及其与功能之间的构效关系,近而探索相关疾病的发病机制,我们需要获得各亚型apoE蛋白。本实验采用RT-PCR方法从肝组织中扩增出apoE3基因的cDNA,将其克隆至克隆载体pGEM-3Z上,阳性克隆的重组质粒DNA经酶切及PCR扩增鉴定测序,结果与报道一致;采用定点突变技术得到apoE2和apoE4基因的cDNA,也将其克隆至克隆载体pGEM-3Z上,经鉴定结果与报道一致。接着将上述三种cDNA亚克隆到原核表达载体pT7-PL中,转化宿主菌BL21（DE3）plysS,在37℃的LB培养基中经IPTG诱导,在相对分子量34000处得到了一条表达条带,进一步用Ni2+的亲和层析获得3种纯化的apoE融合蛋白。apoE2、apoE3、apoE4基因的克隆及表达证明了利用原核表达系统表达入apoE的可行性,对于今后进一步研究apoE各亚型的分子结构、生物学功能,探索不同apoE各亚型与疾病的关系具有重要的意义。

语种： 中文

作者： 毕浩;刘志国;屈伸

作者机构： [毕浩; 刘志国; 屈伸] 华中科技大学同济医学院基础医学院生化与分子生物学系;[毕浩; 刘志国; 屈伸] 武汉工业学院生物与化学工程系

会议名称： 湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会

会议时间： 2004-10

会议地点： 中国武汉

关键词： 米糠蛋白;血管紧张素转化酶;抑制剂

摘要： 血管紧张素转化酶（angiotensin converting enzyme,ACE）是含有Zn2+辅基的羧二肽酶,在血压调节中扮演重要的角色。血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）通过抑制血管紧张素Ⅰ向血管紧张素Ⅱ转换以及阻止ACE降解缓激肽而起降血压的作用。目前已有许多合成的ACE抑制剂药物,但由于药效持续时间不长,停药后会有反弹,使血压升高;而且,这类药物对肾功能有一定损害。因此,寻找食物

语种： 中文

作者： 刘志国;屈伸;宗义强;邓耀祖;冯宗忱

期刊： 华中科技大学学报(医学版),2004年33(5):526-530 ISSN：1672-0741

作者机构： [刘志国] 武汉工业学院生物与化学工程系;[屈伸; 宗义强; 邓耀祖; 冯宗忱] 华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系;华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系 武汉430023;武汉430030

关键词： 极低密度脂蛋白受体;脂蛋白;基因缺失诱变

摘要： 目的研究VLDL-R中8个配体结合重复序列(ligand-binding repeats,LBR)在配体结合中的作用并探讨结合位点的结构.方法采用基因缺失诱变方法,构建不同LBR缺失的VLDL-R重组体.将其分别导入无LDL-R功能性表达的ldl-A7细胞.配体结合实验观察转染细胞与荧光标记的VLDL、β-VLDL的结合能力,并采用同源建模的方法预测受体N-端328个氨基酸的配体结合域的空间结构.结果配体结合实验显示LBR1和LBR2对受体结合VLDL、β-VLDL最为重要;LBR3对结合VLDL也有重要作用,但对结合β-VLDL无明显影响.模型显示受体N-端328个氨基酸的配体结合域呈现弧形口袋样结构,前3个LBR结构紧凑,呈棒状,负电荷相对集中,与功能特性吻合,LBR5与LBR6之间的连接区赋予口袋结构一定的伸缩性,适应配体大小的变化.结论受体N-端的前3个LBR含有与配体结合的位点.该区域特定的空间结构与理化特性是结合功能的重要基础.

语种： 中文

作者： 王亚林;刘志国

期刊： 粮食与饲料工业,2003年(6):46-47 ISSN：1003-6202

作者机构： 武汉工业学院生物与化学工程系,湖北,武汉,430023;[王亚林; 刘志国] 武汉工业学院

关键词： 米糠;大米蛋白活性肽;制备工艺;提取;蛋白酶;酶水解

摘要： 研究了米糠蛋白的提取,酶水解及米糠蛋白活性肽的分离制备方法.结果表明:在pH值为1.82,温度为37 ℃时,米糠蛋白经胃蛋白酶酶解作用120 min,经凝胶树脂Sephadex层析能获得较多的多肽组分.

语种： 中文

作者： 刘志国;江会峰;屈伸

期刊： 生物信息学,2003年1(1):20-24 ISSN：1672-5565

作者机构： 武汉工业学院生物与化学工程系,武汉,430023;华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系,武汉,430030;[屈伸] 华中科技大学;[江会峰; 刘志国] 武汉工业学院

关键词： 极低密度脂蛋白受体;结构预测;同源模建

摘要： 极低密度脂蛋白受体(VLDL-R)的配体结合域具有8个富含半胱氨酸的配体结合重复序列(ligand-binding repeats,LBR),被认为是与配体结合的部位.该受体与含7个类似重复序列的低密度脂蛋白受体(LDL-R)的配体结合特性明显不同.为了明确VLDL-R中8个LBR在配体结合中的作用并探讨结合位点的结构,本研究采用计算机辅助蛋白质结构预测方法,在二级结构分析的基础上,通过同源建模方法预测受体N-端328个氨基酸的配体结合域空间结构,结果显示该区域呈现弧形口袋样结构,其中前3个LBR结构紧凑,呈棒状,负电荷相对集中,推测这一特征结构是配体结合的重要结构基础,结构分析同时表明在LBR5与LBR6之间连接区的弹性结构可以赋予结合位点一定的伸缩性,利于其与不同配体的结合.本研究预测结果首次提出了VLDL-R配体结构域结构及结合位点的结构特征,并与已有的实验结果一致.

语种： 中文

作者： 刘志国;屈伸

期刊： 中国生物化学与分子生物学报,2003年19(6):683-689 ISSN：1007-7626

作者机构： 武汉工业学院生物与化学工程系,武汉,430023;华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系,武汉,430030;[屈伸] 华中科技大学;[刘志国] 武汉工业学院

关键词： 极低密度脂蛋白受体;结构与功能;表达调控;信号作用

摘要： 极低密度脂蛋白受体(VLDL-R)属于低密度脂蛋白受体(LDL-R)超家族,结构上与LDL-R极为相似,而在结合特性、组织分布及生理功能上存在较大的差异.近年来的研究表明,VLDL-R配体结合域中的重复序列参与配体的结合,并已初步确定受体N端的4个重复序列中含有与配体结合的重要位点;在哺乳动物体内,VLDL-R主要分布于脂代谢活跃的组织细胞,如:心肌、骨骼肌和脂肪组织等,表明其与脂质尤其是甘油三酯的代谢密切相关;动脉粥样硬化(AS)的病变斑块组织中该受体的表达量很高,推测VLDL-R参与了AS的病变过程;在不同的细胞内,VLDL-R及其亚型的表达并不一致,并发现与各种生理、病理变化相关,已经发现多种转录因子参与VLDL-R表达的调控;基因敲除研究也不断揭示VLDL-R新的功能意义,特别是发现了VLDL-R在脑的发育过程中的重要信号作用,这些研究已使人们对VLDL-R有了新的更全面的认识.

语种： 中文

作者： 刘志国;屈伸

作者机构： [刘志国; 屈伸] 武汉工业学院生物与化学工程系;[刘志国; 屈伸] 华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系

会议名称： 湖北省暨武汉市生物化学与分子生物学学会第七届第十四次学术年会

会议时间： 2003-08

摘要： <正>极低密度脂蛋白受体（VLDL-R）是低密度脂蛋白受体超家族的成员。自1993年克隆以来,对其结构与功能、组织分布与表达调控、信号机制与生理作用等有了更深入的了解。目前的研究表明VLDL-R不仅参与脂质的代谢,而且在细胞迁移、神经发育等众多方面发挥重要作用。

语种： 中文

作者： 郭红亮;刘志国;田俊;冯宁;屈伸

期刊： 中国动脉硬化杂志,2002年10(1):6-9 ISSN：1007-3949

作者机构： [郭红亮] 武警湖北总队医院检验科;[刘志国] 武汉工业学院生物化学工程系;[田俊; 冯宁; 屈伸] 华中科技大学同济医学院生物化学教研室;华中科技大学同济医学院生物化学教研室 湖北省武汉市430061;湖北省武汉市430023

关键词： 极低密度脂蛋白;脂蛋白受体;基因转染;中国仓鼠卵巢细胞;β-极低密度脂蛋白;逆转录-聚合酶链反应

摘要： 为了探索极低密度脂蛋白受体配体结合域中8个重复序列在结合脂蛋白中的作用。利用基因缺失诱变的方法，构建了不同重复序列缺失的极低密度脂蛋白受体缺失突变真核表达载体，并将各重组体转移至体外培养的中国仓鼠卵巢细胞。通过逆转录-聚合酶链反应检测到外源基因的表达。转染细胞与DiI标记的β-极低密度脂蛋白结合实验发现：重复序列1，2缺失的极低密度脂蛋白受体结合β-极低密度脂蛋白的能力明显降低。为进一步研究极低密度蛋白受体结构与功能的关系奠定了基础。

语种： 中文