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一种高产的碱性脂肪酶及基因与菌株和应用

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成果类型:
专利
发明/设计人:
杨江科;张奕昀;魏子翔
申请/专利权人:
武汉轻工大学
专利类型:
发明专利
语种:
中文
申请时间:
2020-02-27
申请/专利号:
CN202010124632.4
公开时间:
2020-06-02
公开号:
CN111218437A
主申请人地址:
430023 湖北省武汉市汉口常青花园学府南路68号
申请地区:
湖北
机构署名:
本校为第一完成单位
主权项:
1.一种脂肪酶ROLIP,其特征在于,所述脂肪酶ROLIP的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。 2.一种脂肪酶基因rolip,用于编码权利要求1所述的脂肪酶,其特征在于,所述脂肪酶基因rolip的碱基序列与SEQ ID NO:2所示的碱基序列具有95%以上的同一性,优选地,所述脂肪酶基因rolip的碱基序列如SEQ ID NO:2所示。 3.权利要求2所述的脂肪酶基因rolip的获取方法,其特征在于,包括如下步骤:通过定点突变的方法将原始脂肪酶第158位的丝氨酸突变为苏氨酸,第247位的谷氨酰胺突变为亮氨酸,第294位的谷氨酰胺突变为组氨酸。 4.一种重组表达载体,其特征在于,包括如权利要求2所述的脂肪酶基因rolip。 5.权利要求4所述的重组表达载体的构建方法,其特征在于,包括如下步骤: 将权利要求2所述的脂肪酶基因rolip通过限制性内切酶EcoR I和Not I双酶切,得到具有粘性末端的脂肪酶基因rolip片段; 将毕赤酵母表达载体pPICZαA分别用限制性内切酶EcoR I和Not I双酶切,得到具有粘性末端的载体pPICZαA片段; 将所述具有粘性末端的脂肪酶基因rolip片段和所述具有粘性末端的载体pPICZαA片段通过T4 DNA连接酶连接,获得脂肪酶重组表达载体pPICZαA-rolip。 6.一种重组表达菌株,其特征在于,包括如权利要求4所述的重组表达载体。 7.根据权利要求6所述的重组表达菌株,其中,所述重组表达菌株的宿主细胞为毕赤酵母。 8.权利要求6或7所述的重组表达菌株的制备方法,其特征在于,包括如下步骤: 将脂肪酶重组表达载体pPICZαA-rolip通过酶切位点将其线性化; 将线性化的重组表达载体pPICZαA-rolip导入宿主细胞中,获得重组表达菌株。 9.权利要求1所述的脂肪酶的生产方法,其特征在于,培养权利要求6或7所述的重组表达菌株,从培养物中获得脂肪酶。 10.权利要求1所述的脂肪酶的应用,其特征在于,将权利要求1中所述的脂肪酶与含脂肪物料接触。
摘要:
本发明属于基因工程技术领域,涉及一种高产的碱性脂肪酶及基因与菌株和应用。本发明的脂肪酶ROLIP的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明提供的脂肪酶ROLIP在原有脂肪酶基础上通过人工定向改造而来,具有显著提高的结构稳定性和表达水平。

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