期刊论文

Construction of the Shuttle Vector Expressing Green Fluorescent Protein and its Application in Lactobacillus acidophilus

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中国畜牧兽医

1671-7236

2015

42

10

2551-2559

10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.10.006

湖北省教育厅项目（D20121804） 国家自然科学基金青年科学基金项目（31302089） 湖北省自然科学基金项目（2012FFBO4804） 国家科技支撑计划（2011BAD26B02）

本校为第一机构

为深入研究嗜酸乳杆菌的作用机理,以温敏型穿梭载体pSET4s为基本骨架,将绿色荧光蛋白（GFP）和嗜酸乳杆菌上、下游同源臂插入该载体,构建GFP标记的穿梭表达载体pSET4s-P1-GFP-P2。利用电转化方法将穿梭表达载体pSET4s-P1-GFP-P2转化入嗜酸乳杆菌,通过抗性和温度双重筛选获得能稳定表达GFP的重组嗜酸乳杆菌,将Western blotting和荧光显微镜观察验证的重组菌命名为ΔMG6243（GFP）。利用荧光显微镜观察和平板计数的方法对重组菌进行遗传稳定性和生物学特性研究。结果显示,重组菌在蓝光激发下可见明显绿色荧光,连传10代仍可见明显荧光,与野生菌相比,其生长特性、酸碱盐耐受性均无显著差别。结果表明...

In order to further study the mechanism of Lactobacillus acidophilus,GFP labeling shuttle expression vector pSET4s-P1-GFP-P2 was constructed by inserting green fluorescence protein（GFP）,upstream and downstream homology arm of Lactobacillus acidophilus based on temperature shuttle expression vector pSET4 s.Recombinant Lactobacillus acidophilus expressing green fluorescence gene was constructed by transforming pSET4s-P1-GFP-P2 into Lactobacillus acidophilus using electrotransformation.We could obtain the recombinant Lactobacillus acidophilus by...