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基于重组酶介导等温扩增-CRISPR/Cas12a的青鱼物种快速鉴定研究

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成果类型:
期刊论文
作者:
于耀鲜;邢冉冉;邓婷婷;王琳;卢思远;...
作者机构:
[陈颖; 于耀鲜] 武汉轻工大学生命科学与技术学院,武汉 430023
[陈颖; 于耀鲜] 中国检验检疫科学研究院,北京 100176
[邓婷婷; 卢思远; 邢冉冉; 王琳] 中国检验检疫科学研究院
[王宏勋; 王丽梅] 武汉轻工大学
语种:
中文
关键词:
青鱼;重组酶介导等温扩增;簇状规则间隔短链重复序列;物种鉴定
期刊:
食品安全质量检测学报
ISSN:
2095-0381
年:
2024
卷:
15
期:
04
页码:
40-48
机构署名:
本校为第一机构
院系归属:
生命科学与技术学院
摘要:
目的 建立一种快速、特异、灵敏地鉴定青鱼物种的方法.方法 以青鱼线粒体 16S rRNA基因的保守序列设计特异性 crRNA,并根据 crRNA 设计重组酶介导等温扩增(recombinase-mediated isothermal amplification,RAA)引物;建立青鱼的RAA-CRISPR/Cas12a快速鉴定方法,并对该方法的检测时间进行优化;同时,评估该方法的特异性和灵敏度,并对青鱼及其近缘物种的市售样品进行检测.结果 该方法仅需25 min完成检测;对青鱼物种的鉴定表现出显著的特异性,并对其近缘物种如草鱼、赤眼鳟、鳡鱼、倒刺鲃的检测结果均呈阴性;方法 灵敏度为 1.0×10‒3 ng/μL(以基因组DNA计);与DNA条形码技术相比,该方法在市售样品的检...
摘要(英文):
Objective To establish a method for rapid,specific and sensitive identification of Mylopharyngodon piceus species.Methods A specific crRNA was designed with the conserved sequence of Mylopharyngodon piceus mitochondrial 16S rRNA gene.Recombinase-mediated isothermal amplification(RAA)primers were designed based on the crRNA.A rapid identification method,RAA-CRISPR/Cas12a was developed for Mylopharyngodon piceus,and the detection time of this method was optimized.The specificity and sensitivity of the method were assessed,and commercially availab...

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