期刊论文

Yu, X.

中文

微生物学报

0001-6209

2010

50

7

931-936

10.13343/j.cnki.wsxb.2010.07.019

国家“十一五”重大传染病专项（2009ZX10004-313） 上海市科委国际合作计划项目（08410703800） 湖北省教育厅科研项目（B20101701）

本校为第一机构

【目的】应用原核表达体系对结核分枝杆菌PPE蛋白家族Rv1168c进行高效表达，进一步进行蛋白纯化和结构分析。【方法】以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板，扩增Rv1168c基因，构建pET32a-Rv1168c重组质粒；转化重组质粒到大肠杆菌DH5α并在BL21(DE3)诱导表达，通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳 (SDS-PAGE)鉴定Rv1168c在大肠杆菌中的表达情况；Ni-NTA His*Bind Resin纯化重组蛋白Rv1168c；SDS-PAGE和质谱分析测定相对分子量后，用圆二色光谱(CD)和同源模建方法分析和检测重组蛋白Rv1168c的二级和三级结构。【结果】成功克隆了971 bp的目的基因Rv1168c，并获得了高纯度的重组蛋白Rv1168c。重组蛋白...

OBJECTIVE: To express and purify the Pro-Pro-Glu (PPE) family protein Rv1168c of Mycobacterium tuberculosis in E. coli. and to study the structure of Rv1168c. METHODS: The Rv1168c gene was amplified by PCR from Mycobacterium tuberculosis H37Rv strain genomic DNA and cloned into a prokaryotic expression vector pET32a The resulting recombinant expression plasmid pET32a-Rv1168c was then transformed into the E. coli strain DH5alpha and a high-level expression E. coli BL21(DE3) was established after induction with Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG). SDS-PAGE and mass spectrum analysis de...