为解决菜籽蛋白原料及制品中真蛋白含量难以测定的问题,建立了一种基于分级和定量2步完成的高选择性菜籽蛋白含量测定方法。通过酸化丙酮溶液和沸水萃取实施分级处理,可将样品中的非蛋白氮分离;结合应用可溶性蛋白的染色法测定和不溶性蛋白的凯氏定氮法测定,可获得样品的真蛋白含量。该方法变异系数不大于2.83%,回收率95%~96%,并可排除本源性非蛋白氮(包括芥子碱和硫甙)及外源性非蛋白氮(包括硝酸盐、铵盐、三聚氰胺和尿素)的干扰。该方法具备良好的抗干扰能力且不受蛋白质溶解性的影响,可推广到更多的植物蛋白制品及原料的真蛋白含量测定中,并可为相关行业的掺杂辨识或品质评价提供可靠手段。